1、適用范圍

    適用于肉制品中胭脂紅著色劑的測定。
2、提取步驟

試劑的配置：

1）硫酸溶液：1+9體積比；

2）鎢酸鈉溶液：C=100g/L；

3）無水乙醇+氨水+水=7+2+1；

4）檸檬酸溶液：C=200g/L；

4）pH=5的水，取100mL的水，用檸檬酸溶液調(diào)節(jié)至pH值=5.

提取過程：
    稱取試樣10 g，均質(zhì)器均質(zhì)1min，然后加入20 mL石油醚提取脂肪，超聲5 min，靜止沉降2 min后棄去石油醚，重復(fù)3次。吹干后加入10 mL提取液（無水乙醇+氨水+水=7+2+1）提取胭脂紅，邊攪拌邊過濾（用30mL帶篩板的固相萃取空柱管進(jìn)行過濾），重復(fù)提取3-5次，收集全部的提取液。70 oC水浴旋蒸至10mL以下，加入1mL硫酸溶液和1mL鎢酸鈉溶液，繼續(xù)70o

注意：1）提取胭脂紅需多次提取，確保提取*；

2）提取胭脂紅的過程中不能用濾紙過濾，因?yàn)闉V紙會(huì)極大程度的吸附胭脂紅色素；

      3）本解決方案創(chuàng)新性的以SPE空柱管作為過濾提取后的肉制品的裝置，相比其他的過濾裝置更為；

      4）提取胭脂紅后所得的樣品溶液，加入硫酸溶液和鎢酸鈉溶液沉淀蛋白后，需要用純水洗滌蛋白殘?jiān)?，這樣可以有效的提取吸附在蛋白殘?jiān)械碾僦t；

      5）本實(shí)驗(yàn)的加標(biāo)回收率是將肉制品去除脂肪后，再加入胭脂紅進(jìn)行加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)。

3、聚酰胺SPE柱凈化步驟凈化：

SPE柱：Welchrom®PA（1g/6mL）

活化：6mL純水；

上樣：將提取步驟處理好的樣品溶液過Welchrom®聚酰胺固相萃取柱，棄去上樣流出液；

淋洗：6mL pH=5的水，6mL甲醇+加酸（6+4），12mL純水洗至中性；

洗脫：6mL無水乙醇+氨水+水(7+2+1)，收集洗脫液。

濃縮：將收集的洗脫液旋蒸至近干，加水定容至10ml，過水膜上機(jī)測定。

標(biāo)樣配置：1 mg./ml胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)溶液，取50 µl并用水定容至10 mL

注：濃縮后的溶液應(yīng)用水系濾膜過濾，不能用有機(jī)系濾膜，因?yàn)橛袡C(jī)系濾膜容易吸附胭脂紅，從而損失回收率。 
4、色譜條件：
色譜柱：月旭Ultimtae^®XB-C18,4.6×150,5µm；

流動(dòng)相：甲醇：0.02 mM乙酸銨溶液，梯度洗脫；

流速：1.0 mL/min；

柱溫：30 ℃

檢測波長：254 nm；

進(jìn)樣量：20 µL
表1：液相色譜梯度洗脫條件